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西美杰独家病毒包装方案:五大流程,一个对策!

23 January 2018 文章作者:admin 有15人对该文章感兴趣 没有评论

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不论是细胞治疗还是基因治疗都离不开病毒载体。目前使用最多的病毒载体类型包括:腺相关病毒(AAV)、慢病毒(Lv)、逆转录病毒(Rv)和腺病毒(Adv)等,这些常用病毒载体特性如下图所示:

特征
慢病毒
Lentivirus
逆转录病毒
Retrovirus
腺相关病毒
AAV
腺病毒
ADV
基因表达
稳转/瞬转
稳转
瞬转
瞬转
是否能感染可分裂的细胞
是否能感染不分裂的细胞
是否能整合到靶细胞基因组
靶细胞的免疫反应
较低
非常低
病毒滴度
+++
++
+++
++++
转染效率
+++
++
+++
++++

 

因此在选择病毒载体时,除了要考虑载体自身特征之外,如何包装并获取高滴度高活性的病毒载体对后续实验至关重要,针对病毒载体制备5大环节,小美为您推荐如下解决方案↓
(图片2)

1. 病毒载体包装质粒系统
西美杰代理的美国Cell Biolabs公司推出的病毒包装系统可满足多种重组病毒包装需求,包括四大类型病毒包装质粒AAV Helper Free System、ViraSafe™ Lentivirus Expression Complete Systems、Platinum Retroviral Expression Systems以及RAPAd® Adenoviral Expression Systems等。更多病毒包装质粒系统介绍请点这里

2. 病毒包装
A. 病毒包装专用转染试剂
西美杰代理的美国Mirus公司新推出的病毒包装专用转染试剂TransIT®-VirusGEN™与TransIT®-Lenti系列,专门针对AAV和Lentivirus设计,相比传统转染方法能获得更高的转染效率和病毒滴度,无动物源成分且兼容多种病毒包装系统及不同细胞系类型。

品名
货号
规格
适用病毒类型
TransIT®-VirusGEN™ Transfection Reagent
MIR 6703
0.3/0.75/1.5mL
AAV & Lentivirus
TransIT®-Lenti Transfection Reagent
MIR 6603
0.3/0.75/1.5mL
Lentivirus

B. Lv/Rv包装效率增强剂Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up
西美杰独家代理的101Bio品牌Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up用于重组慢病毒或逆转录病毒包装过程,可促进病毒基因组转录和RNA稳定,使转染效率提高10倍左右。

品名
货号
规格
适用病毒类型
Lentivirus 10X Titer-Up
P906
1 mL
Lentivirus
Retrovirus 10X Titer-Up
P909
1 mL
Retrovirus

C. AAV/Adv病毒释放液Virus-High® AAV/ADV Release Solution
西美杰独家代理的101Bio品牌Virus-High® AAV/ADV Release Solution是一款无需反复冻融,即可从细胞中快速高效收获AAV/Adv病毒以及其他非分泌型无囊膜病毒的试剂。

品名
货号
规格
适用病毒类型
Virus-High® AAV / Adv Release Solution
P900
10 mL
AAV & Adv

3. 高效快速病毒浓缩试剂与纯化试剂盒
西美杰独家代理的美国Cali-bio和Cell Biolabs品牌专门针对病毒载体设计的高效重组病毒浓缩纯化试剂(盒),在获得重组病毒高回收率的同时大大简化操作流程,无需超速离心设备,是中小规模样本纯化的首选方案。

重组病毒类型
品名
货号
特点
逆转录病毒
(Retrovirus)
Retrovirus Concentration Solution(5×) 
逆转录病毒浓缩试剂
CB300904
无需超速离心;
1小时内病毒浓缩10-100倍;
浓缩后病毒适用于各种细胞;
慢病毒
(Lentivirus)
Lentivirus Concentration Solution(5×)
慢病毒浓缩试剂
CB300905
ViraBind™ Lentivirus Purification Kit
VPK-104
操作时间< 2h,无需超速离心;
回收率>90%,纯化效果与CsCl方法相当
腺相关病毒
(AAV)
ViraBind™ AAV Purification Kit
(适用样本量为2个10cm皿或1个15cm皿收获的上清)
VPK-140
适用于纯化AAV-2与AAV-DJ;
操作时间约3h;
ViraBind™ AAV Purification Mega Kit
(一次处理样本量可达10个15cm皿收获的上清)
VPK-141
获得AAV纯度>95%,回收率>60%
腺病毒
(ADV)
ViraBind™ Adenovirus Miniprep Kit
(适用样本量为1个T75瓶或1个10cm皿收获的上清)
VPK-099
采用特殊滤膜和离心柱;
操作时间约30min,无需超速离心;
ViraBind™ Adenovirus Purification Kit
(适用样本量约为4个T75瓶收获的上清)
VPK-100
回收率>90%,纯化效果与CsCl方法相当

4. 病毒滴度检测试剂盒
精确测定重组病毒滴度是提高下游实验可控性,重复性和准确性的前提,西美杰代理的Cell Biolabs品牌针对不同病毒载体的特性分别设计的了多种滴度测定试剂盒,并且兼容了高效和精确的测定方法。

重组病毒类型
品名
货号
特点
慢病毒
(Lentivirus)
Lentivirus Rapid Quantitation Kit
VPK-112
快速定量,操作过程45-60min;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度,纯化前或纯化后样品都可检测;
灵敏度:1010个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清
Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit
VPK-107
专利Pull-down技术分离出病毒相关P24蛋白,去除游离P24蛋白;
ELISA方法精确定量有活性的重组慢病毒滴度,避免传统方法检测总P24蛋白导致的误差
Traditional p24 ELISA Kit
VPK-108-H
ELISA方法检测总P24蛋白定量慢病毒滴度
逆转录病毒
(Retrovirus)
QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit
VPK-120
快速定量,操作过程45-60min;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度,纯化前或纯化后样品都可检测;
灵敏度:1.5×109个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清
腺相关病毒
(AAV)
QuickTiter™ AAV Quantitation Kit
VPK-145
快速定量,操作过程<2h;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度;
灵敏度:纯化前AAV可达109 GC/mL,对于纯化后AAV可达5×1010 GC/mL
腺病毒
(ADV)
QuickTiter™ Adenovirus  Quantitation Kit
VPK-106
快速定量,操作过程45-60min;
荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度,纯化前或纯化后样品都可检测;
灵敏度:1010个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清
QuickTiter™ Adenovirus Titer  Immunoassay Kit
VPK-109
无需空斑形成实验,避免复杂的铺琼脂步骤,操作更简便;
传统方法10天才可完成的实验,用该试剂盒仅需2.5天,有ELISA和ICC两种方法供选择;
QuickTiter™ Adenovirus Titer ELISA Kit
VPK-110
可用于所有41个血清型的腺病毒

 

5. 病毒感染增强试剂
西美杰代理的Cell Biolabs品牌还针对不同病毒载体研发了专用促病毒感染试剂,能显著提高病毒对靶细胞的感染,进而提高基因表达效率。

品名
货号
规格
特点
ViraDuctin™ Lentivirus Transduction Kit
LTV-200
40 次
复合型试剂能与慢病毒或逆转率病毒形成复合物,与Polybrene®相比病毒感染效率可提高2-6倍,适用于原代细胞和干细胞
LTV-201
200次
ViraDuctin™ Retrovirus Transduction Kit
RV-200
40次
RV-201
200次
ViraDuctin™ AAV Transduction Kit
AAV-200
10次
有效提高重组AAV在多种细胞内的转染效率,包括传统方法转导效率低的细胞和非分裂细胞,如原代细胞和干细胞。该试剂使用方便,仅需2h,是AAV转染非分裂细胞的首选。
AAV-201
50次
ViraDuctin™ Adenovirus Transduction Reagent
AD-200
10次
该试剂让重组腺病毒感染不依赖于细胞的CAR(柯萨奇病毒-腺病毒受体)水平,可显著提高病毒感染低CAR或无CAR表达的细胞,如原代细胞或干细胞,还可提高转入基因的表达效率
AD-201
50次

如果您对上述方案感兴趣,欢迎随时登录北京西美杰网站www.xmjsci.com查询相关产品或拨打西美杰全国服务热线400-050-4006,小美期待您的垂询。

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