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慢病毒系列

5 December 2008 文章作者:admin 有4,076人对该文章感兴趣

慢病毒源于反转录病毒,但又有所不同。在感染能力方面比反转录病毒还强,可有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、干细胞等多中类型的细胞,又很少引发基因的免疫反应。如果您的实验需要长期稳定的基因表达或沉默,而目的细胞又很难转染,那慢病毒是您的最理想选择。野生型的HIV大小约为9.8kb,故插入片段一般在4-5kb左右,这对于大部分的实验来说应该够用了。

在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题,是无法高效转导非分裂期细胞,而腺病毒载体虽然能

Cell BioLabs慢病毒系列产品:
  • 慢病毒表达系统
  • 慢病毒浓缩&纯化试剂盒
  • 慢病毒滴度滴定试剂盒
  • 慢病毒快速定量试剂盒
  • 慢病毒高效转染试剂
  • 293LTV慢病毒宿主细胞
  • 转导非分裂期细胞,但在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容易引起免疫反应。慢病毒载体不但可以感染非分裂期细胞,还具有容纳外源性目的基因片段大、稳定整合持久表达、免疫反应小等优点。市场上的慢病毒是由人类免疫缺陷病毒(HIV),通过去除env、vif、vpr、vpu等毒性基因改造而来。复制缺陷型HIV载体通常用水泡口炎病毒G糖蛋白来代替HIV-1的包膜进行包装,从而更安全,宿主范围更广,还能增加病毒的滴度。

    美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为慢病毒研究人员提供完备的重组慢病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括慢病毒的最新一代表达系统,针对慢病毒滴度低的软肋而专门设计的慢病毒浓缩纯化试剂盒,慢病毒的滴度滴定及定量,以及慢病毒高效转染试剂和慢病毒宿主细胞等,几乎覆盖慢病毒研究中的所有技术环节。

    ViraSafe™ 最新一代慢病毒表达系统(ViraSafe™ Lentiviral Expression Systems)

    ViraSafe™ 最新一代慢病毒表达系统:包括4个载体,两个Packaging包装载体(包含病毒包装蛋白基因,将其分离到两个载体上)、Transfer载体质粒(包含目的基因)以及包膜质粒(包含VSV-G基因)慢病毒载体的发展经历了3个阶段:第一代慢病毒载体系统是以三质粒系统为代表。在构建时把HIV-1基因组中进行包装、逆转绿和整合所需的顺式作用元件与编码反式作用蛋白的序列分离,分别构建在三个独立的质粒表达系统上,即包装质粒、包膜质粒和载体质粒,用这三种质粒共同转染包装细胞如人胚肾293T细胞,在细胞上清中即可收获只有一次感染能力、而无复制能力的慢病毒颗粒。第二代慢病毒载体系统从安全性角度又删去了HIV的所有附属基因。第三代慢病毒载体又进一步做了些安全方面的改进,如删除了U3区的3′LTR和tat基因。

    安全性始终是大家关心的问题,毕竟是HIV改造过来的,不容许有一点闪失。国内的实验室很多都达不到P2的级别,甚至是一堆人挤在一个房间里做各种各样的实验。Cell BioLabs的新一代慢病毒表达系统对广泛应用的第三代慢病毒进行了改进,将Rev与gag和pol基因分离,这意味着要产生原始的病毒,还需要更多的重组步骤。这样完整的ViraSafe™ 慢病毒表达系统包含5个载体(包括一个对照载体),安全性更高。

    与目前市场上流行的新一代慢病毒相比,ViraSafe™ 慢病毒表达系统进行了进一步的优化。如在载体质粒上插入了cPPT(增加基因表达水平)及WPRE(增加感染滴度),在一个包装载体中插入腺病毒VA基因以增加感染滴;同时在整个系统载体的多个部分做了一些基因的优化或删减和插入以增加病毒的安全性。经过这样的优化,ViraSafe™ 最新一代慢病毒表达系统的包装容量增大到10kb,并且感染细胞的滴度及外源基因的表达水平均提高,并且降低了载体间重组机率,更安全。并且有多种启动子类型,如通用型无启动子及真核EF-1α类型启动子等供您选择。点击阅读更详细产品信息“ViraSafe™ 慢病毒表达系统——Cell BioLabs慢病毒表达载体

    产品名称 货号 产品说明
    ViraSafe™ Universal Lentiviral Expression System VPK-211-ECO 通用慢病毒表达系统,MCS位点前无启动子,克隆时可插入特异性启动子序列,分双嗜和多嗜两种
    VPK-211-PAN
    ViraSafe™ Lentivirus Expression System (Puro) VPK-212-ECO EF-1α真核细胞启动子类型,带有Puro抗性筛选标记,分双嗜和多嗜两种
    VPK-212-PAN
    ViraSafe™ Lentivirus Expression System (Neo) VPK-213-ECO EF-1α真核细胞启动子类型,带有Neo抗性筛选标记,分双嗜和多嗜两种
    VPK-213-PAN
    ViraSafe™ Lentivirus Expression System (Hygro) VPK-214-ECO EF-1α真核细胞启动子类型,带有Hygro抗性筛选标记,分双嗜和多嗜两种
    VPK-214-PAN

    ViraBind™ 慢病毒浓缩&纯化试剂盒(ViraBind™ Lentivirus Concentration & Purification Kits)

    一般说来,通过3-4个慢病毒表达质粒转染293T包装细胞后48-72小时后产生慢病毒颗粒,收集病毒颗粒并冰冻。为获得高滴度的慢病毒悬液,可通过超速离心的方法浓缩。但是在超速离心的过程中,也会浓缩其他杂质,如细胞碎片、膜片段、以及细胞培养基内的变性蛋白等。这些杂质对于病毒颗粒的后继操作是有害的,如降低细胞转染效率,对转染细胞的细胞毒性等,特别是当转染原代细胞的时候。同时应用于试验动物的时候,会引发免疫反应。因此在慢病毒的应用过程中,不但需要较高的滴度,较高的纯度也是很重要的。

    Cell Biolabs的腺病毒浓缩&纯化试剂盒(ViraBind™ (PLUS) Lentivirus Concentration & Purification Kits)使用了专利技术,根据纯化后继步骤的需求,又可分为两种,一种ViraBind™ Lentivirus Concentration and Purification Kit,采用常规离心,3小时内完成,一次可将100 mL的慢病毒上清(106-7 TU/mL) 纯化浓缩到100 μL 的 109-10 TU/mL。另一种是ViraBind™ PLUS Lentivirus Concentration & Purification Kits,将上述纯化过程中的小纯化柱换成了小型透析装置,能一次纯化更多、获得更理想的慢病毒。点击阅读更详细产品信息“慢病毒纯化&浓缩——Cell Biolabs慢病毒浓缩纯化试剂盒

    产品名称 货号 产品说明
    ViraBind™ Lentivirus Concentration and Purification Kit (100ml/prep) VPK-090/091 使用纯化柱常规离心浓缩纯化慢病毒
    ViraBind™ PLUS Lentivirus Concentration and Purification Kit (50ml/prep) VPK-095 使用透析装置常规离心浓缩纯化慢病毒,中提
    ViraBind™ PLUS Lentivirus Concentration and Purification Mega Kit (500ml/prep) VPK-096 使用透析装置常规离心浓缩纯化慢病毒,大提

    QuickTiter™ 慢病毒滴度滴定试剂盒(QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit (Lentivirus-Associated HIV p24 ELISA))

    在慢病毒感染细胞前,为检测病毒上清培养液内病毒的活性,并确定病毒与转染细胞之间的比率,需要确定病毒的滴度。病毒的滴度可以通过转染HT-1080或Hela细胞,然后使用抗体筛选稳定的细胞转染株,进行计数和数值QuickTiter™ 慢病毒滴度滴定试剂盒统计。但是,这样的方法需要耗费几周的时间,特别是转染细胞株的筛选过程。

    p24蛋白是HIV病毒的内壳蛋白,被作为检测慢病毒滴度的指标物。目前市场上的HIV p24 ELISA方法也被用于慢病毒的滴度滴定,但是该手段不能区分慢病毒产生的p24和由宿主293T细胞产生的游离p24,因此得到的最终数值是全部p24的含量,这对于慢病毒滴度的精确测定是不够的。Cell BioLabs的QuickTiter™ 慢病毒滴度滴定试剂盒(QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit (Lentivirus-Associated HIV p24 ELISA))(货号:VPK-107)是一种基于酶联免疫的方法检测慢病毒产生的p24蛋白的ELISA方案,采用专利的Virus Pulldown技术分离出慢病毒p24和293T细胞p24蛋白,这样只检测有效的慢病毒p24蛋白。

    另外,西美杰也向您推荐传统的p24蛋白ELISA检测方案,如果您只需要对慢病毒的滴度进行大概的定量,Cell BioLabs的QuickTiter™ Lentivirus Quantitation Kit (Traditional HIV p24 ELISA)(货号:VPK-108)在价格上比上述试剂盒更有优势。点击阅读更详细产品信息“慢病毒滴度检测——QuickTiter™慢病毒p24 ELISA滴度检测”。

    QuickTiter™ 慢病毒快速定量试剂盒(QuickTiter™ Lentivirus Rapid Quantitation Kit)

    一般说来,如果已经获得了纯化的病毒液,通过测量OD260来估算病毒颗粒的总含量不失为一种快捷的多的病毒定量方案。Cell BioLabs的QuickTiter™ Lentivirus Rapid Quantitation Kit(目录号:VPK-108)提供了类似原理的快速检测方案。该试剂盒的工作原理是,首先使用核酸酶将病毒悬液内的核算分子降解,然后用特异性的慢病毒捕获珠子结合慢病毒,从而分离出蛋白核酸复合物,洗脱下慢病毒后进一步降解,然后标记其病毒核酸,通过480/520 nm滤镜荧光仪下读取数据,对照慢病毒DNA标准曲线得出慢病毒滴度。该方法快速简捷,只需45-60分钟;检测灵敏。点击阅读更详细产品信息“慢病毒定量——Cell BioLabs慢病毒快速定量试剂盒”。

    ViraDuctin™ 慢病毒高效转染试剂(ViraDuctin™ Lentivirus Transduction Kit)

    慢病毒载体因其独特的优势,逐渐成为表达载体中的大热。慢病毒载体与其他表达载体相比,最大的优势是它们能感染分裂和非分裂的细胞。这对于众多干细胞和难转染细胞的研究者而言,可谓是一根及时的救命稻草,能解ViraDuctin™ 慢病毒高效转染试剂决令人头疼的转染效率低的问题。然而慢病毒本身的转染效率也不是很高。

    在慢病毒转染细胞的过程中最重要的一步是融合,只有一些较小的慢病毒载体才能转导进细胞,因此,病毒颗粒的吸附是慢病毒转染的限速步骤。在慢病毒的转染试验中,多聚阳离子,如聚凝胺®(Polybrene®)由于被发现能促进转染的效率被应用于慢病毒的转染,其作用机理可能是通过中和细胞与病毒颗粒之间的静电排斥而促进它们之间的贴附。ViraDuctin™ 慢病毒高效转染试剂(ViraDuctin™ Lentivirus Transduction Kit)(货号:LTV-200/LTV-201)能大大提高慢病毒转染效率,比Polybrene(聚凝胺)效率提高2-6倍,对于难转染的细胞,如原代细胞和干细胞效果良好。点击阅读更详细产品信息“慢病毒转导——ViraDuctin™慢病毒高效转导试剂”。

    293LTV慢病毒宿主细胞(293LTV Lentiviral Host Cell Line)

    来源于人原代胚肾细胞株293的转化细胞,和目前常用的、作为慢病毒包装细胞的293细胞相比,繁殖更快,贴壁更牢,慢病毒产量更大。该kit内一瓶293LTV约1.0×106个细胞。

    美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供全套的慢病毒技术解决方案,ViraSafe™ 最新一代慢病毒表达系统有多种样式供您选择,ViraBind™ 慢病毒浓缩&纯化试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的慢病毒,QuickTiter™ 慢病毒系列提供传统和专利技术的p24不同ELISA检测方法,同时还有采用OD260方法快速定量慢病毒的方案;Cell BioLabs还有专为慢病毒载体用的293LTV细胞及高效转染试剂供您选择,如果您对慢病毒产品感兴趣,请致电010-88597838/9569/8795/4237到西美杰科技有限公司垂询慢病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

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